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全组织琥珀酸脱氢酶活性染色试剂盒说明书

发布时间:2022-11-15 阅读:358

全组织琥珀酸脱氢酶(SDH)活性染色试剂是一种旨在使用合成电子受体四氮唑兰染料通过反应系统的作用,组织样本中酶活性部位呈现出蓝黑色沉淀现象而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的其适合于各种动物组织样品琥珀酸脱氢酶的活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,显色清晰。


琥珀酸脱氢酶(succinnate dehydrogenaseSDHEC 1.3.99.1)是三羧酸循环(tricarboxylic acid cycleTCA)或Krebs环中与细胞线粒体膜相关的重要元素,位于线粒体内膜,参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸(succinate)的氧化反应,产生延胡索酸(furmarate),通过黄素腺嘌呤二核苷酸(Flavin Adenine DinucleotideFAD)传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理,使用人工电子受体染料硝基蓝四氮唑(Nitro Blue TetrazoliumNBT,接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸(Reduced flavin Adenine DinucleotideFADH2)的电子,而被还原,产生不溶性蓝色或蓝黑色甲暨色素。据此证明组织细胞琥珀酸脱氢酶的活性。


保存染色液(Reagent B)和反应液(Reagent C在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4冰箱里,有效保证6

染色开始前,将-20℃冰箱里的试剂置于室温下融化;移取2.7染色液(Reagent B到新的15毫升锥形离心管,加入300微升反应液(Reagent C,混匀后,标记为染色工作液,置于冰槽里,避免光照。然后进行下列操作。

1. 准备16孔细胞培养板

2. 放进新鲜切除的动物组织样本(注意:建议组织大小为0.5厘米厚,1厘米长;如果过大,好刀切处理一下

3. 将组织压平

4. 小心加3毫升清理液(Reagent A,浸没整个组织

5. 小心抽去清理液(Reagent A

6. 小心加3毫升染色工作液,浸没整个组织

7. 放进37℃培养箱里孵育10分钟,避免光照

8. 小心抽去染色工作液

9. 小心3毫升清理液(Reagent A,浸没整个组织

10. 小心移去切片上的清理液(Reagent A

11. 重复实验步骤910二次

12. 小心3毫升固着液(Reagent D,浸没整个组织

13. 室温下孵育15分钟

14. 小心抽去固着液(Reagent D

15. 小心3毫升清理液(Reagent A,浸没整个组织

16. 小心抽去清理液(Reagent A

17. 重复实验步骤1516二次

18. 后续石蜡切片(6微米厚)或冰冻切片(10微米厚)

19. 在光学显微镜下观察:表达琥珀酸脱氢酶的组织细胞为阳性组织细胞,呈现蓝黑色。


注意事项

1. 本产品为10次操作

2. 操作时,须戴手套

3. 用户根据实际需求,按比例配制试剂用量

4. 反应液(Reagent C避免反复冻融

5. 阴性对照时,染色工作液不含有反应液(Reagent C

6. 可以使用50毫摩尔丙二酸钠(Sodium malonate作为抑制剂

7. 整个操作,在避光状态下进行

8. 染色孵育时间,根据样品和酶活性强弱调整,通常为530分钟

9. 全组织染色存在其染色不均匀、组织内部染色渗透困难等局限

10. 样品染色后保存,避免光照

11. 本公司提供系列组织细胞酶活性染色试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定显色清晰

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