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AO染色液(1mg/ml)

发布时间:2022-10-13 阅读:529

产品简介:

Acridine Orange属于三环杂芳香燃料,可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有:1、插入性结合,AO嵌入核酸双链的碱基对之间,这种结合方式主要为AO与DNA的结合,其荧光发射峰为530nm,激发后呈绿色荧光;2、静电吸引,带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合,这种结合方式主要为AO与RNA的结合,其荧光发射峰为640nm,激发后呈红色荧光,少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此,吖啶橙嵌合到双链DNA中显绿色,与单链DNA或RNA结合时发桔黄色或橙红色荧光。

AO染色液(1mg/ml)为储存液,使用时应稀释到合适浓度后使用。染色后在荧光显微镜下观察,AO可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。AO使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。AO染色常与EB染色合用双染,因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。


产品组成:

Acridine Orange Stain(1mg/ml)

10ml

4℃ 避光

使用说明书

1份


自备材料:

荧光显微镜

低速离心机

PBS

细胞计数板

载玻片、盖玻片


操作步骤(仅供参考)

收集细胞(采用流式细胞仪检测时,应先固定细胞),用PBS清洗细胞1次,计数并调节细胞浓度至106/ml。

取适量的细胞悬液,加入Acridine Orange Stain(1mg/ml),使AO终浓度为8.5~17μg/ml,轻轻混匀。

室温避光染色15~20min,滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。

荧光显微镜下观察(激发波长488nm),计数并拍照。


染色结果:

正常细胞

单链DNA或RNA

细胞被均匀染成黄绿色荧光

(发射波长510~540nm)

凋亡细胞

双链DNA

染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒(发射波长大于600nm)


注意事项:

Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜剂,较少单独使用。

吖啶橙染色常与EB染色合用,可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

如有低温离心机进行离心效果佳。

操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


有效期: 12个月有效。常温运输,4℃保存。

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